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Prueba |
Descripción |
Resultado |
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Agar |
Es un medio diferencial que permite distinguir entre enterobacterias que hidrolizan
lactosa y las que no lo hacen. La hidrólisis de la lactosa produce ácidos orgánicos y las colonias que la hidrolizan adquieren un color rojo. Las colonias lactosas negativas permanecen incoloras aunque el medio tira a amarillo por la subida de pH que origina la utilización de las proteínas (peptona) del medio Se inoculan placas del medio y se incuban a 37 oC |
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Agar sangre |
Medio de cultivo enriquecido con la adicción de sangre. Las hemolisinas son
enzimas que lisan los hematies. Las bacterias que producen estas enzimas presentan
un halo transparente alrededor de las colonias a consecuencia de la lisis de los
hematies. Se siembre por agotamiento en estría en placas de agar sangre y se incuba |
Hemolisis
alfa |
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Beta |
Esta enzima hidoliza la lactosa originando glucosa y galactosa Se añade un sustrato artificial ortocitrofenial galactósido (ONPG) que hidrolizado por la ß-galatosidasa originandose en color amarillo |
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Catalasa |
La catalasa es una enzima que proteje a las células frente al peróxido
de hidrógeno producido en el metabolismo del oxígeno. Cataliza la formación
de agua y oxígeno a partir del peróxido de hidrógeno. Es util para distinguir Streptococcus (negativa) de Staphylococcus (positiva) y Clostridium (negativa) de Bacillus (positiva) La actividad catalasa se detecta añadiendo unas gotas de peróxido de hidrógeno sobre las colonias en placa que no sea de agar sangre (daría falsos positivos). La producción de burbujas indica la presencia del enzima. |
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Citrato |
Es uno de los test del IMVIC usado para diferenciar enterobacterias. el crecimiento
consume el ácido y como consecuencia se produce un incremento de pH en el
medio y el indicador tira de verde a azul. El citrato es la única fuente de carbono y se realiza sembrando la bacteria en la superficie de un agar de Simmon's inclinando el tubo |
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Coagulasa |
La coagulasa es un enzima capaz de desnaturalizar la bibrina del plasma. Los Staphylococcus
aureus patógenos dan una reacción postiva y los no patógenos
negativa Se añade una suspensión densa de bacterias a un tubo pequeña con plasma y se incuba a 37 oC. Se observa la coagulación a las 4 y 24 h sin sacarlos de la estufa. |
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Contraste |
El microscopio de contraste de fases es un sistema en el que se acentúa la diferencia del índice de refracción entre las células y el medio incrementando así el contraste en células translúcidas sin uso de colorantes. | |
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Descarboxilasa |
Los aminóacidos al perder el grupo carboxilo convierten en aminas que incrementan
el pH del medio y el indicador (púrpura del bromocresol) vira a violeta. Las
descarboxilasas son útiles en la diferenciación de enterobacterias. Las bacterias se inoculan en medios complejos que contienen lisina, ornitina o arginina al 1% y un indicador de pH (púrpura de bromocresol) |
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DNasa |
Algunas bacterias excretan nucleasas que despolimerizan el DNA Se hace una estría gruesa una placa conteniendo DNA. Se revela después de incubar con HCL 0,1 N que precipita el DNA no hidrolizado. |
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Esporas |
Las Endosporas son formadas por Bacillus y Clostridium. Son Formas de resistencia,
metabolicamnete inactivas que resisten la alta temperatura, la desecación
y la radiación. Las endosporas pueden sobrevivir al calentamiento y originan nuevas formas vegetativas en un medio de cultivo. Se inocula un tubo de caldo con una suspensión sospechosa de contener endosporas. Se calienta a 80 oC durante 10 min. Se enfría y se incuba a temperatura adecuada. |
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Fenilalanina desaminasa |
Las desaminasas catalizan la pérdida de NH3 en un aminoácido
originando un ácido carboxílico Se incolulan tubos inclinados conteniendo un medio complejo y fenilalanina. Después de la incubación se añade una solución de cloruro férrico. |
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Fermentación |
Las bacterias anaerobias o anaerobicas facultativas a menudo fermentan carbohidratos
a ácidos orgánicos y gas (H2 o CO2). Estos pueden
detectarse incluyendo en el medio un indicador de pH y una campana Durham. Se pueden
ensayar diferentes azúcares como sustrato para diferenciar especies sobre
todo bacterias entéricas. Se inocula la bacteria en un medio conteniendo una pequeña cantidad de peptona, un indicador de pH y una fuente de carbono fermentable al 1-2 % y se coloca dentro de los tubos una campana Durham. |
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Gram |
La tinción de Gram es la más importante de las tinciones diferenciales.
Las células Gram positivas retienen el cristal violeta cuando se tratan con
etanol mientras que las gram negativas no lo tienen y se tiñen entonces del
color rojo de la safranina. Diferencias en la estructura de la pared son las responsables de este comportamiento. Se tiñe con cristal violeta Se trata con lugol como mordiente Se decolora con etanol 96o Se añade safranina como colorante de contraste |
Bacilos
Gram-negativos |
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Hidrólisis |
La esculina contiene un carbohidrato unido a un compuesto aromático. Este
test se usa a menudo para distinguir especies de Streptococcus. Se crecen las bacterias en un medio complejo que contiene 0,01 % de esculina y un 0,05 de citrato férrico. |
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Hidrólisis |
La mayoría de los polímeros son demasiado grandes para ser transportados
dentro de las células. Las bacterias excretan enzimas extracelulares que hidrolizan
esos polímeros transportando al interior de la célula en monómeros
que les sirven para crecer. La producción de proteasas es evaluada por incorporación de una proteína (gelatina o caseína) en un medio sólido en placa. La placa se inunda con ácido que precipita la proteina no hidrolizada. |
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Hidrólisis |
Algunas bacterias excretan lipasas extracelulares que pueden hidrolizar lípidos
grandes en sustratos de bajo peso molecular que son trasportados al interior de la
célula para ser utilizados en el crecimiento. Una emulsión de lípidos y un indicador llamado Spirit Blue se incorporan en un medio sólido complejo. |
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Hidrólisis |
Los polisacaridos, como el almidón son demasiados largos para ser transportados
al interior de la célula. Los microorganismos excretan amilasas que hidrolizan
esos polímeros hasta oligo o monosacáridos que pueden usarse como sustratos
para crecer. La hidrólisis de almidón es analizada en medios conteniendo almidón en placa. Después de incubar se inundan las placas con lugol que al unirse con el almidón intacto forma un complejo púrpura. |
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Hidrólisis |
El hipurato es un compuesto orgánico aromático que puede ser hidrolizado
enzimáticamente originando benzoato y glicina. Este test se usa a menudo para
diferenciar especies de Streptococcus. Una suspensión de bacterias se añade a una solución de hipurato y se incuba 2 horas. En ese momento se añade la nihidrina. |
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Indol |
Uno de los test del IMVIC utilizado para diferenciar enterobacterias. Existen bacterias que producen triptofanasa que convierte el triptófano en indol La bacteria se crece en medios que contienen triptófano (caldo de triptoma). La presencia de indol se ensaya añadiendo dimetilaminobenzaldehído. |
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Inhibición |
El KCN inhibe la cadena de transporte de electrones uniéndose a los citocromos
impidiendo el crecimiento microbiano. Sin embargo, algunas bacterias no son inactivadas
y pueden nacer. Las bacterias se inoculan en caldo de peptona que contiene cianuro potásico. |
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Motilidad |
La movilidad de las bacterias es consecuencia de la presencia de flagelos. El movimiento
puede observarse en preparación en fresco con el microscopio de contraste
de fase Para ver la movilidad se realiza una preparación en fresco que se observa en contraste de fases. La movilidad debe distinguirse del movimiento Browniano debido a las corrientes en la preparación. |
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O-F |
En condiciones aerobias las bacterias pueden oxidar la glucosa hasta CO2
gas. El oxígeno es el aceptor final de e- en el metabolismo respiratorio.
en condiciones anaerobicas en ausencia de un aceptor de e- como nitrato, las bacterias
sólo pueden utilizar la glucosa por vía fermentativa. En este test
se evalúa la capacidad de las bacterias para oxidar y/o fermentar produciendo
ácido que se detecta gracias al azul de bromotinol (indicador de pH) Es útil
en la distinción de pseudomonas y enterobacterias. Se inoculan tubos de medio con asas de punta recta. Uno de los tubos se recubre con aceite de parafina para aislarlo del oxígeno (tubo de fermentación) y otro no (tubo de oxidación) |
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Oxidasa |
La presencia de citocromo C oxidasa en la cadena de trasporte de e- puede detectarse
utilizando un aceptor de e- artificial p-fenilendiamina. Este test se usa para diferenciar
pseudomonas (positivo) de enterobacterias (negativo) Se impregnan discos de papel con parafenilandiamina y se coloca en un cultivo creciendo en placas de agar nutritivo. |
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Producción |
Muchas bacterias producen sulfuro de hidrógeno a partir de aminoácidos
azufrados (cisteína o metionina) o tiosulfato. La fermentación de sulfhídrico puede ser detectada incluyendo hierro reducido en el medio para formar un precipitado negro de FeS Se inocula un medio de agar nutritivo conteniendo tiosulfato metionina y sulfato ferroso. |
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Reducción |
Algunas bacteris pueden usar nitratos como aceptor final de e- en la respiración.
el nitrato puede ser reducido a nitrito o en un paso más a gases (óxidos
de nitrógeno). Las enterobacterias y pseudomonas son usualmente positivos. Las bacterias se inoculan en medios conteniendo nitrato potásico. El nitrito procedente de la reducción de células puede detectarse añadiendo alfanalfilamina y ácido sulfanílico produciendose un color rojo. Se puede saber si el nitrato puede haberse reducido a más que a nitritos produciendose gas. Si al añadir zinc en polvo no hay color rojo es que no hay nitrato porque se ha reducido a gas (desnitrificación) |
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Rojo de |
Es uno de los test del IMVIC para bacterias entéricas. Algunas vias fermentativas
originan ácidos orgánicos mientras otras originan productos que son
neutros. Las bacterias se crecen en caldo de glucosaçpeptona. Si se fermenta el azúcar el pH baja por debajo de 4.3. Se añade rojo de metilo como indicar que es rojo a pH <4.3. y amarillo a pH >4.3. |
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Tioglicolato |
Este medio se usa para determinar el efecto del oxígeno sobre el crecimiento
microbiano. Un tubo con medio semisólido contiene tioglicolato para reducir
el potencial redox del medio. Así sólo hay oxígeno en la superficie
y no en el resto del tubo. Un indicador redox, resazurina, indica si hay oxígeno
(rojo) o no (incoloro). El tubo es inoculado con un asa de punta y se incuba hasta que se produce su crecimiento. |
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Ureasa |
Este enzima hidroliza la urea (H2N-CO-NH2) y origina amonio
lo que producirá un incremento del pH que puede detectarse con un indicador. Las bacterias se inoculan en un medio con glucosa-peptona y urea al 2%. Como indicador de pH se utiliza rojo fenol |
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Utilización |
La mayoría, pero no todas las bacterias pueden crecer en medios simples con
una única fuente de carbono. Este método permite ensayar tal habilidad
y la capacidad para utilizar sustratos específicos. Las bacterias se inoculan en medios simples conteniendo diferentes sustratos orgánicos como fuentes de cargono y energía. |
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Voges- |
Uno de los test del IMVIC para enterobacterias es el Voges Proskauer. Las especies
que llevan a caso fermentación a butanodiol de la glucosa acumulan acetoína
en el medio. Las bacterias se inoculan en caldo glucosa-peptona. Las especies que llevan a cabo la fermentación butanodiólica de la glucosa aumentean acetoína en el medio. Se añade alfanaftol en medio alcalino (KOH). La acetoina se convierte en diacetilo que reacciona formandose un color rojo |
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